现货|EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)

EndoFree Plasmid Maxi Kit
纯化得到多至 500 ug无内毒素高转染级纯质粒或科斯质粒DNA
纯化得到的DNA 内毒素低于0.1 EU/µg
包括LyseBlue 试剂优化操作，确保产量
获得高产量的高拷贝质粒DNA
使用LyseBlue，获得最佳的裂解和最大的DNA产量
EndoFree Plasmid Maxi Kit 将高效去除内毒素整合入质粒纯化，无需额外的抽提或亲和层析去除脂多糖。通过QIAfilter Mega-Giga预制试剂条过滤清楚细菌裂解液，在重力流QIAGEN-tip 500 阴离子交换柱上纯化质粒,EndoFree Plasmid Maxi Kit 规格
背景
 内毒素，也称作脂多糖或LPS，使革兰氏阴性菌的细胞膜组分，如 E. coli （见图“E.coli 细胞膜图示”）。在抽提质粒过程中的裂解阶段会释放内毒素，它会降低敏感细胞系的转染效率（见图“质粒纯化方法 vs. 转染效率”和 “质粒纯化 vs. 转染效率”及表格“质粒制备的内毒素水平”和“用EndoFree 抽提的 DNA 确保原代细胞高效转染”）。此外，内毒素可以影响转染过程中质粒DNA的吸收， 这是由于它会与DNA竞争转染试剂。内毒素也会激活诸如巨噬细胞和B细胞等免疫细胞中的非特异性免疫反应，导致错误干扰转染结果。这些反应包括合成蛋白和脂质体，如 IL-1 和前列腺素。综上所述，内毒素是转染实验构建中一种不可控制的变量，可影响转染结果的成功率和可重复性，致使转染实验难以比较和说明。在基因治疗研究中，内毒素会引起内毒素休克综合症、促动补体分支，从而造成干扰。
原理
抽提所得质粒DNA的内毒素水平取决于纯化方法（见表格“质粒的内毒素水平”）。泥浆式硅胶法制备的DNA的内毒素水平非常高。QIAGEN、QIAfilter 和HiSpeed Plasmid Kits 以及 2x CsCl超离心法可制备高纯度的DNA，内毒素水平非常低。EndoFree Plasmid Kits 包含整合的内毒素去除步骤，可制备内毒素 <0.1 EU/µg的质粒DNA。
QIAfilter、HiSpeed 和 EndoFree Plasmid Kits中提供的QIAfilter Cartridges是一种独特设计的过滤器，可代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges 可完全去除SDS沉淀，清除细菌裂解液，相比离心可节约很多时间。 QIAfilter Midi 和 Maxi Cartridges 是注射器规格（见图“QIAfilter Midi Cartridge”）通过推动可使液体通过过滤器。
IAGEN纯化柱使用独特的阴离子交换树脂，专用于纯化核酸。创新的分离技术确保DNA纯度等同于甚至高于两次 CsCl梯度离心法制备的DNA。 预装的纯化柱以重力流的方式制备，不会流干，将质粒制备的手动时间降至最少。QIAGEN整个质粒制备系统避免使用有毒物质，诸如苯酚、氯仿、 ethidium bromide和CsCl，将对环境和用户的危害降至最低。
过程
在碱性条件下裂解细菌细胞，应用 QIAfilter Mega-Giga Cartridge过滤裂解液（见图“QIAfilter Mega-Giga Cartridge”）。在滤液中加入内毒素去除液，置于冰上孵育。然后将滤液装到阴离子交换柱上，在合适的盐浓度和pH值条件下，质粒DNA会选择性地结合到阴离子交换柱上。RNA、蛋白、代谢物和其他小分子组分通过中等盐浓度去除，应用高盐浓度缓冲夜可洗脱超纯的质粒 DNA（见操作流程）。应用异丙醇沉淀浓缩DNA，离心后可获得DNA。
应用
EndoFree Plasmid Kits可制备不含内毒素的DNA，非常符合转染实验高度可重复性和高效率的要求 （见图“质粒纯化方法 vs. 转染效率”和“质粒纯度 vs. 转染效率”以及表格“各种方法制备的质粒内毒素水平比较”和“不含内毒素的DNA确保原代细胞高效转染”）。应用 QIAGEN试剂盒制备的不含内毒素的超纯DNA也适用于基因治疗研究和基因疫苗（见“超纯的100 纯化柱”）及其他高灵敏度应用。