说明 凝胶迁移或电泳迁移率检测是一种用于检测DNA 结合蛋白的简单而快速的方法。这种方法被广泛用于序列特异DNA 结合蛋白的研究,如转录因子。该检测基于蛋白和DNA 的复合体在非变性聚丙烯酰氨凝胶中的迁移速率大大低于DNA 片段或双链寡核苷酸的迁移速率。凝胶迁移实验首先是将纯化蛋白或蛋白混合物( 如核或细胞提取物) 与32P 末端标记的可能含有蛋白结合位点的DNA 片段共同孵育。然后用非变性聚丙烯酰氨凝胶分析反应产物。使用未标记的DNA 片段或含有目的蛋白结合位点的寡核苷酸或其它无关的DNA 序列进行竞争性实验,来确定DNA 结合蛋白假定结合位点的特异性。 Core System (Cat.# E3050,核心系统) 包含HeLa Nuclear Extract、SP1 和AP2 Consensus Oligos,可以作为阳性对照,是经过凝胶迁移实验检验的可靠系统。另外,核心系统还包含T4 多聚核苷酸激酶和Kinase 10X buffer 用于标记寡核苷酸,以及Gel ShiftBinding 5X Buffer。E3300 包含以上所有组分,此外,还包括AP1、OCT1、CREB、NF-kB 和 TFIID 结合的共有寡核苷酸。 特点 . 阳性对照:核心系统包括HeLa 细胞核提取物及AP2 和SP1 共有寡核苷酸。 • 通用:寡核苷酸可以5` 末端标记,并用作蛋白特异探针或在竞争性实验中用作非标记的寡核苷酸。