【实验原理】: Western Blot 印迹方法,又称为免疫印记,是将获得的蛋白质样品通
过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离,并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物(NC膜或PVDF 膜)上,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合,再与经辣根过氧化物酶标记(偶联)的二抗结合,最后用ECL超敏发光液试剂检测。如果转印膜上含有靶蛋白,经X 光片曝光、 显影后,则会在X-光片上出现特异性蛋白条带。
Western blot 实验分为三个部分:
1. 样品蛋白质的制备、 蛋白质含量测定 2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
3. 凝胶转膜及其检测
以提取细胞蛋白为例Western 印记杂交实验流程图:
提取细胞总蛋白、测定含量
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制备SDS-PAGE 胶
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蛋白样品变性、电泳
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电泳转膜
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封闭
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一抗
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TBST 洗涤